本发明公开了一种藻毒素降解菌的分子标记、藻毒素降解菌及藻毒素降解菌的制备方法。所述分子标记的序列如序列表中SEQ ID NO:1所示。所述藻毒素降解菌包括上述分子标记。该藻毒素降解菌的分子标记能够作为特异性标识物能够用于筛选藻毒素降解菌,含有该分子标记的目的基因的感受态细胞能够有效降解藻毒素。本发明实施例提供的制备方法,将启动子构建到含有该分子标记的枯草芽孢杆菌RIK1285后能够得到藻毒素降解菌,且枯草芽孢杆菌RIK1285为分泌型的益生菌,这使得该藻毒素降解菌不仅能够有效分泌藻毒素降解酶,从而降解水体中的藻毒素解决藻毒素污染的问题,而且枯草芽孢杆菌RIK1285具有益生功能,这使得本发明实施例制备的藻毒素降解菌能够在实际中应用。
一种微囊藻毒素MC‑LR的批量纯化方法,旨在克服现有技术中从自然水体中得到的微囊藻样品复杂度高、杂质干扰大,得到的藻毒素含量低,且样品重复性差导致藻毒素制备工艺需不断调整的缺点,该方法是从铜绿微囊藻中提取并纯化得到微囊藻毒素MC‑LR,包括以下步骤:一、铜绿微囊藻的实验室培养;二、微囊藻毒素MC‑LR的粗提取;三、采用MCI GEL CHP20P为填料的色谱柱去除粗提液中的杂质,得到初步纯化的微囊藻毒素;四、通过制备型HPLC对初步纯化的微囊藻毒素进一步纯化,得到色谱纯度大于95%的微囊藻毒素MC‑LR。本发明得到的微囊藻毒素纯度较高,且能够实现批量制备,为后续藻毒素的各项研究奠定了物质基础。
本发明提供了一种微囊藻毒素降解酶MlrA的全长cDNA序列、编码蛋白和应用,该微囊藻毒素降解酶MlrA全长cDNA序列的核苷酸序列如SEQ IDNO:1所示,其编码氨基酸序列如SEQ ID NO:3所示本发明的微囊藻毒素降解酶MlrA全长cDNA序列对藻毒素的降解具有独特性和专一性,可用于检测水体或鱼类产品体内微囊藻毒素的情况。本发明的微囊藻毒素降解酶MlrA可作为粗酶制剂,用于优化养殖水体,有效地防止藻毒素对养殖水产品食用安全的危害,还可为鱼类饵料添加剂,减少水体中微囊藻毒素对鱼类肝细胞DNA的损伤,维持肝脏细胞在蓝藻水华高发时期对藻毒素的去毒能力